[VIP第1年] 指数:3
本发明涉及植物**培养技术领域，尤其是涉及一种绣球的液体培养基组培快繁方法。背景技术：绣球(hydrangeamacrophylla)为虎耳草科绣球属落叶灌木,别名八仙花、**花、粉团花、雪球花、草绣球等，是园林上应用***的观赏植物。原产于我国长江流域及以南，自然株高2m。叶对生，倒卵或椭圆形，边缘有锯齿，伞房花序顶生，直径20cm，近球形。花色多变，青白色，渐转粉红色，再转紫红色，花色美艳。其花色又常随土壤的酸碱度而改变,土壤ph值4～6时，花色多呈蓝色；ph值，则呈红色。绣球花叶片翠绿，花色鲜艳，盛开时花团锦簇，美丽多姿，每簇花可开2个月之久，观赏期长。由于绣球花的孕性花极为少数，所以不易结种，常用分株、压条或扦插方法繁殖，但分株、压条繁殖倍率低，速度慢，而扦插繁殖又会受到季节的限制，不能常年生产苗木，很难满足市场的需求。技术实现要素：针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种繁殖周期短，效率高，成本低的绣球的液体培养基组培快繁方法。本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：s1：外植体选择；s2：外植体消毒；s3：诱导培养；s4：增殖培养；s5：生根培养，其中。DMEM培养基适用于多种哺乳动物细胞的体外培养和实验研究。山东MEM a培养基供应商
从而提高菌株增殖速率，但是浓度过大会导致抑菌现象，后期菌株增殖放缓，以产酸为主，2-羟基乙胺还能够作为阳离子表面活性剂，使得细胞壁疏松，提高细胞通透性，促进谷氨酸释放到发酵液，从而提高了谷氨酸产量和糖酸转化率。三、通过上述实验确定cecl3添加量为10mg/l、2-羟基乙胺的添加量40mg/l，在此基础上，研究发酵培养基b对菌体浓度、谷氨酸含量以及糖酸转化率的影响。对照组1采用发酵培养基a进行发酵，不采用发酵培养基b，100l发酵罐中含有70l发酵培养基a；发酵工艺参照实施例1。对照组2：发酵培养基b中不添加琥珀酸，其余同实施例1。对照组3：发酵培养基b中不添加壳聚糖，其余同实施例1。对照组4：发酵培养基a中添加5g/l的琥珀酸，其余同对照组1。实验组为实施例1。具体结果见表1。表1组别菌浓度od600nm谷氨酸产量g/l糖酸转化率％对照组：对照组1采用单一发酵培养基发酵，谷氨酸产量和糖酸转化率明显低于实验组，各组别菌体浓度差异并不大；对照组4在对照组1的基础上添加了琥珀酸，对菌体浓度并没有影响，谷氨酸产量和糖酸转化率也没有明显差异，可能原因是，发酵前期以菌体增殖为主，产酸较少，琥珀酸对菌体增殖并没有明显的刺激作用。山东MEM a培养基供应商MEM培养基提供了细胞生长所需的基本营养成分。
本发明属于氨基酸生产技术领域：，具体涉及一种优化的谷氨酸发酵培养基。背景技术：：谷氨酸，是一种酸性氨基酸。分子内含两个羧基，化学名称为α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索逊1856年发现的，为无色晶体，有鲜味，微溶于水，而溶于盐酸溶液，等电点。大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。谷氨酸钠俗称味精，是重要的鲜味剂，对香味具有增强作用。谷氨酸钠***用于食品调味剂，既可单独使用，又能与其它氨基酸等并用。用于食品内，有增香作用。在食品中浓度为，每人每天允许摄入量为0－120微克/千克(以谷氨酸计)。在食品加工中一般用量为－。谷氨酸主要以微生物发酵制备而得，通过优化发酵培养基，使得菌体增殖速率提高，可以提高氨基酸的产量。现有技术对谷氨酸发酵培养基优化进行了大量的研究，例如文献1“基于pb试验和响应面分析法对谷氨酸棒杆菌cnl021发酵培养基优化，**酿造2014年”，通过**陡爬坡试验和响应面分析法对发酵培养基组成进行优化，得到谷氨酸棒杆菌**适发酵培养基组，较未优化培养基的发酵培养基产酸量提高了。
对于大多数哺乳类动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围内都适宜。在生产、配制细胞培养基的过程中，渗透压的测定较为重要，有助于防止在生产、配制过程中出现称量等方面的错误。反应器高密度培养动物细胞过程，在添加碳酸氢钠的过程中注意渗透压的监控，防止渗透压过高对细胞的损害。温度温度对细胞培养基有较大的影响，温度过高可引起营养成份的降解或破坏，细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。如细胞培养液中的谷氨酰胺，在高温条件下降解的速度较快，如35℃贮存时，放置3天降解25%左右，在4℃贮存3周降解约20%。粘滞性及表面张力含血清细胞培养液的粘滞性主要是由血清引起的，在转瓶培养贴壁细胞时，培养液的粘滞性对细胞生长没有多大影响；但在生物反应器悬浮培养细胞时，细胞培养液的粘滞性则直接影响搅拌转速控制及搅拌剪切力对细胞造成的损伤程度。表面张力对细胞培养有较大的作用，尤其在利用生物反应器进行悬浮培养时，搅拌和通气都会引起泡沫的产生。对于含血清培养液，由于血清中多种蛋白的存在，搅拌时产生的气泡较多，气泡的上升运动对细胞的损伤程度还有争议，但气泡的破裂对细胞有明显的损伤作用。为降低这种损伤。RPMI1640培养基在免疫细胞培养中表现出色。
**早开发的基础培养基（minimalessentialmedium,MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可***用于多种细胞培养，并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM（MinimalEssentialMedium）培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压**型的，也有过滤**型的；还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’smodifiedDMEM）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。无酚红培养基避免了酚红对细胞的潜在毒性作用。山东MEM a培养基供应商
F12培养基提供了丰富的营养支持。山东MEM a培养基供应商
在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养，诱导培养基的配方为ms+，诱导培养基的ph值为，在s4中，将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中，增殖培养基的配方为ms+～～，增殖培养基的ph值为，在s5中，将s4中的绣球组培苗放入生根培养基中，生根培养基的配方为1/2ms+～～，生根培养基ph值为。通过采用上述技术方案，通过液体**培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。使用本生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应诱导培养基。山东MEM a培养基供应商
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