胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶(Trypsin)、0.02%EDTA和酚红,不含Ca2+和Mg2+。该消化液已用0.22μm滤膜过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。本胰酶细胞消化液具有方便快速的特点,通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。使用说明:贴壁细胞的消化:1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。2、加入少量胰酶细胞消化液(含酚红),略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来;此时吸除胰酶细胞消化液;加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。4、如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。5、如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。培养细胞时,胰酶和双抗该怎么用?重庆EDTA胰酶采购
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37°℃时,胰酶溶液的作用能力**强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。天津重组胰酶产品介绍EDTA是一种化学螯合剂,主要作用在于能螯合Ca、Mg离子,使细胞分离。
胰酶使用注意:1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。胰酶配制方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调,过滤除菌。)3、pbs(:称取胰酶粉末,先用少许灭菌过的PBS调成糊状,然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜,过滤灭菌,分装,4℃保存备用。);或是hanks或是D-hanks液配制(1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks平衡盐溶液()调成糊状,然后再补足D-Hanks平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡;2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH至。)一般,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高。
胰酶和双抗怎么保存?
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双抗的保存:双抗通常情况下在-20°C保存一年。由于该试剂在4°C下长期存放是不稳定的,分装后在-20°C下避光保存。青霉素在2-8°C存放时间不应超过4天,链霉素相对稳定一点,在2-8°C可以存放30天左右。双抗从冻融后基本成分已开始降解。胰酶的保存:胰酶可在-20°C下保存一年。随着时间延长,胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存,在使用前从-20°C冰箱取出。尽量避免在4C长期保存。 胰蛋白酶溶液作为细胞分离试剂广泛应用于贴壁细胞的连续培养。
胰酶消化贴璧细胞原理胰酶是一种重要的消化酶,它在人体消化过程中起到了关键作用。胰酶主要由胰腺分泌,它能够帮助人体消化食物中的蛋白质、脂肪和碳水化合物等营养物质。而胰酶消化贴壁细胞则是指胰酶在消化过程中与肠道内的贴壁细胞发生作用的机制。胰酶消化贴壁细胞的原理主要包括胰酶的合成、分泌和作用三个过程首先是胰酶的合成。胰酶是由胰腺内的特殊细胞合成的。这些细胞受到胃内食物的刺激后,通过胰腺神经末梢的刺激而开始合成和分泌胰酶。合成的胰酶经过胰管进入小肠。接下来是胰酶的分泌。胰酶的分泌主要通过胰腺分泌液的产生和排泄来实现。当胃内食物通过幽门进入小肠后,小肠壁上的细胞会分泌一种叫做胃腺素的物质,这种物质能够刺激胰腺分泌液的分泌。胰腺分泌液中含有胰酶和其他消化酶,它们经过胰管进入小肠,与食物中的营养物质发生作用。***是胰酶的作用。胰酶主要通过两种方式作用于贴壁细胞。一种方式是直接作用,胰酶直接与贴壁细胞接触并发挥作用。另一种方式是间接作用,胰酶作用于食物中的营养物质,将其分解为小分子物质后再与贴壁细胞发生作用。 胰蛋白酶是一种异源蛋白酶,与培养皿结合可以降解细胞膜上的蛋白质。重庆EDTA胰酶采购
胰蛋白酶是一种动物源性产品,是培养细胞过程中常用的酶。重庆EDTA胰酶采购
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关,在℃时,胰酶的作用能力**强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度()的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。但是对于EDTA可能会干扰后续的测试分析时,推荐选择不含EDTA的消化液。本产品含有(Trypsin),溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。为改良型,除了具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点之外,消化时间更短,消化效果媲美进口产品,特别适用于难消化的细胞。 重庆EDTA胰酶采购
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