[VIP第1年] 指数:3
**早开发的基础培养基（minimalessentialmedium,MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可***用于多种细胞培养，并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM（MinimalEssentialMedium）培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压**型的，也有过滤**型的；还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’smodifiedDMEM）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验设置。内蒙古Ham's F12培养基
cs液体培养基和1/2cs液体培养基在用不同ph超纯水(ph为)配制时的ph都较为稳定，在未调ph的情况下，可直接用于多种植物培养。如图8所示。(2)以克新18号马铃薯无菌苗为例，观察在未调ph和将ph调至：a、培养基制作方法：随机选取超纯水，测得其ph为，用于配制8种不同的液体培养基。第一种：1/2ms未调ph液体培养基，其为取1/2ms基本培养基置于ph为；第二种：1/2cs未调ph液体培养基，其为取1/2cs基本培养基置于ph为；第三种：ms未调ph液体培养基，其为取ms基本培养基置于ph为；第四种：cs未调ph液体培养基，其为取cs基本培养基置于ph为；第五种：1/，其为取1/2ms基本培养基置于ph为，调ph至；第六种：1/，其为取1/2cs基本培养基置于ph为，调ph至；第七种：，其为取ms基本培养基置于ph为，调ph至；第八种：，其为取cs基本培养基置于ph为，调ph至。b、培养方法：从培养实例4所述培养基获得长势**的马铃薯幼苗，在清水中缓苗2-3d后选取长势一致的马铃薯幼苗，如图9-a所示，置于上述8种不同液体培养基8d，每隔2d更新1次液体培养基；于温度22-23℃、湿度50-70％、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。内蒙古Ham's F12培养基减血清培养基提高了实验的可重复性。
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以及无血清培养的基础细胞培养基。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，***适于多种正常细胞和肿*细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少。常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清，这样才能维持细胞活力，促进细胞增殖。针对不同的动物细胞，现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方，营养成份更加丰富，血清使用量可降低至1～3%，由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。（serumfreemedium，SFM）经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免**污染造成的危害。无血清培养基确保了实验结果的高度准确性。
此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般**繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气**器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后**繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇**法（fractionalsterilization）。采用间歇方式达到**目的。将**物品置于阿诺流通蒸气**器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气**器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的**属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气**器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在℃。RPMI1640培养基确保了细胞的高效生长。内蒙古Ham's F12培养基
减血清培养基提高了实验结果的可靠性。内蒙古Ham's F12培养基
无血清培养基，一般是在合成培养基的基础上，加入成份完全明确的或部分明确的血清替代成份，达到既能满足动物细胞培养的要求，又能有效克服使用血清所带来问题的目的。无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分，才能帮助细胞贴壁生长，包括以下几大类物质：1）促贴壁物质：一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉*细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2）促生长因子及***：针对不同细胞添加不同的生长因子。***也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些***是许多细胞必不可少的，如胰岛素。3）酶**剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中需含酶**剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。**常用的是大豆胰酶**剂。4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。内蒙古Ham's F12培养基
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