PBS缓冲液,是生物化学研究中使用**为***的一种缓冲液,主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二级解离,缓冲的pH值范围很广,而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2,以提供二价阳离子。
配制方法播报称取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中,用HCl调节溶液至7.4,***加蒸馏水定容至1L即可得0.01M PBS缓冲液。作用播报PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在**适条件下参与生物反应,所以使用PBS是优先。在细胞培养中,它通常用于洗涤传代培养中的细胞,以及在计数细胞时作为稀释溶液。 [2]PBS也不是***的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持比较好的条件保证生物活性物质保持其**完整的特性 [1]。 缓冲溶液的作用是在有限的范围内调整溶液的pH值,使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围。重庆缓冲液是什么
PBS缓冲液的应用9.实验样品的洗涤:在分子生物学实验中,常常需要洗涤样品,去除杂质和不需要的物质。PBS缓冲液可以作为洗涤液,能够快速有效地洗涤样品,保持样品的纯净度。10.细胞培养:PBS缓冲液是细胞培养过程中不可或缺的一部分。在细胞培养过程中,经常需要将细胞从培养皿中取出或转移至其他容器中,PBS缓冲液可以用来洗涤细胞,保持细胞的完整性和活性。11.抗体染色:在免疫组化实验中,常常需要使用PBS缓冲液进行抗体的稀释和染色步骤。PBS缓冲液能够提供适当的离子环境,保持抗体的活性和稳定性。12.组织切片处理:在组织学实验中,组织切片处理是不可或缺的一个步骤。PBS缓冲液可以用于洗涤组织切片,保持切片的形态结构和稳定性。山西DPBS缓冲液哪家便宜缓冲液使用中的注意事项。
该酶标IsC的工作浓度应为1/1?600。?????棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度:①用包被液将抗原由1:50开始作比倍稀释后进行包被,洗涤。②将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1:100稀释,加样,保温、洗涤。③加按工作浓度稀释的酶标IsC抗体,保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后读取A值。⑤选择强阳性参考血清的A值为0.8左右、阴性参考血清的A值小于0.1的包被抗的稀释度作为工作浓度,从中选取**适工作浓度。?1.2夹心法测抗原?????在夹心ELISA法中,可用棋盘滴定法同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。①抗体免*球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10.0、1.0和0.1微克/毫升,分别在ELISA板上进行包被,每一浓度包括3个纵行,洗涤。②在1个横行各包被孔中加入强阳性抗原液,另1横行加入弱阳性抗原液,第3横行加入阴性对照液,保温、洗涤。③将酶标抗体用稀释液稀释成3个浓度,例如1:1?000、1:5?000和1:25000。分别加入每个包被浓度的1个纵行中,保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后,读取A值。⑤以强阳性抗原的A值在0.8左右、阴性参考的A值小于0.1的条件作**适条件,据此选择包被抗体和酶抗体的工作浓度。
3.高温高压**后,4℃保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度:25mMTris-HCl(),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L配制方法:1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。2.高温高压**后,4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。SolutionII(质粒提取用)组份浓度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml,充分混匀3.室温保存,此溶液保存时间比较好不要超过一个月注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌SolutionIII(质粒提取用)组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压**后,4℃保存。MEDTA()组份浓度:MEDTA配制量:1L配制方法:1.称取gNa2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至(约20gNaOH)。注意:pH值至,EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后,高温高压**。6.室温保存。1MDTT组份浓度:1MDTT配制量:20ml配制方法:1.称取gDTT,加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的MNaOAc()。生化实验中加入缓冲液的目的和作用。
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制100nm pH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升(1M=1 mol/L),而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml 0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入100ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。 [2]通过选择合适的缓冲液可以确保酶在条件下进行催化反应。贵州有酚红缓冲液常用知识
缓冲溶液是无机化学及分析化学中的重要概念。重庆缓冲液是什么
ph值缓冲液常用三种
pH酸碱度常用的三种标准溶液:pH分别为4.0、7.0和10.0。标准缓冲液(应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液),目前标准溶液有7种,在我国一般使用以下3种溶液:(pH值在25℃时)。1.邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)pH4.003;0.05M。2.混合磷酸盐(Na2HPO4):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864;0.025M3.硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182;0.01M。三种标准缓冲液的配置方法:1.pH4,邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液:精密称取在115±5℃干燥2~3小时的邻苯二甲酸氢钾[KHC8H4O4]10.12g,加水使溶解并稀释至1000ml。2.pH7,磷酸盐标准缓冲液(pH7.4):精密称取在115±5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠4.303g与磷酸二氢钾1.179g,加水使溶解并稀释至1000ml。3.pH9,硼砂标准缓冲液:精密称取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g(注意:避免风化),加水使溶解并稀释至1000ml,置聚乙烯塑料瓶中,密塞,避免与空气中二氧化碳接触。 重庆缓冲液是什么
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