[VIP第1年] 指数:3
二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验积累，存在较大的主观性。实际上，个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红，只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测，结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，细胞培养液pH很快下降；打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值：H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3－NaHCO3⇌Na++HCO3－此外，还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低，在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一种非离子两性缓冲液，在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用，细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10～25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。DMEM高糖培养基能够促进肿瘤细胞的快速增殖。内蒙古DMEM/F12培养基哪家好
1)、初代培养：绣球外植体，将叶片剪去，自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次。使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min，其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成，将外植体接种到诱导培养基中培养，建立无菌再生系统，诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。其中诱导培养基为ms+～～，诱导培养基的ph值为。(2)、继代培养：以建立的无菌再生系统为对象，将无菌外植体转接到增殖培养基，其中增殖培养基为ms+～～，培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。每隔8～12周转接入新的增殖培养基，增殖培养基的ph值为。(3)、生根培养：经过继代培养的绣球组培苗，取2～3cm的顶芽，放入生根培养基，其中生根培养基为1/2ms+～～，生根培养基的ph值为。诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。。内蒙古DMEM/F12培养基哪家好DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。
但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH～，在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50%，使用中**好单独配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。
平衡盐溶液（balancedsaltsolution，BSS）简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体，兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度、同时供给细胞生存所必需的能量和无机离子成分的作用。各种BSS的缓冲系统有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液为例，它们主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hank’s液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗将要在细胞培养基中储存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1几种常用的平衡盐溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成分，同时参与许多重要的细胞功能活动。但它们有使细胞凝集的作用，在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时，宜采用Ca2+、Mg2+含量较低的Dulbecco液或无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。MEM培养基含有必要的氨基酸和维生素。
生产上一般采用冷水喷淋冷却，冷却到40-50℃后，输送到预先已经**过的罐内。（四）、间歇**与连续**的比较1、歇**的***和缺点***是设备要求低，不需另外设置加热、冷却装置；操作要求低，适于手动操作，适合于小批量生产规模；适合于含有大量固体物质的培养基的**。缺点是培养基的营养物质损失较多，**后培养基的质量下降；需进行反复的加热和冷却，能耗较高；不适合于大规模生产过程的**；发酵罐的利用率较低。2、连续**的***和缺点***是**温度高，可减少培养基中营养物质的损失；操作条件恒定，**质量稳定；易于实现管道化和自控操作；避免了复的加热和冷却，提高了热的利用率；发酵设备利用率高。缺点是对设备的要求高，需另外设置加热、冷却装置；操作较麻烦；染菌的机会较多；不适合于含大量固体物料的**；对蒸汽的要求高。由此可见，无论在理论上或者在实践上，与间歇**过程相比，连续**的***十分明显。因此，连续**越来越多地被用培养基的**。无酚红培养基确保了细胞实验结果的准确性。内蒙古DMEM/F12培养基哪家好
F12培养基确保了实验结果的一致性和可靠性。内蒙古DMEM/F12培养基哪家好
二、基本原理麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被***用于培养酵母菌品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万：培养基性能测试实用指南SN/：培养基性能测试实用指南品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万Systec培养基制备器产品描述SystecMediaPrep培养基制备器可精确便捷地对微生物培养基进行快速制备和**。Systec培养基制备器，不同型号可用于制备10-120升的培养基*操作简单，安全可靠温度和压力严格控制锁定装载舱口和外部盖品牌：Systec型号：MediaPrep-120参考报价：面议转2433：实验室培养基制备质量保证通则：实验室培养基制备质量保证通则.pdf品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万培养基的制备及**1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培养基的配置方法。3.掌握干热**和高压蒸汽**的操作方法。品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万培养基生产新理念：一键式制备德国systec发明一款专门用于培养基**制备的特殊**锅――培养基制备器。自动分装：培养基制备后通过硅胶管道连接分装系统进行全自动分装，整个分装系统由微电脑主机精确控制，并内置紫外灯**，保证分装真正无菌状态。内蒙古DMEM/F12培养基哪家好
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