[VIP第1年] 指数:3
常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据干细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的干细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于干细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。胶原酶：胶原酶是比较少用的，一般是用原代培养时，从组织消化下干细胞。这种方法作用温和，对干细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。胰酶的质量是影响干细胞的消化的关键因素之一，如果配的比较标准，消化的时候就容易消化，反之就不易消化。还要在你看到消化过头的情况下，如果干细胞下来的比较多了，这时可以连同cmf或pbs加上营养液一起传。营养液中有血清，胰酶遇到血清就会自动终止消化，但这样操作对干细胞是有一定的影响的。对于容易消化的干细胞，加入pbs缓冲液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s（根据细胞消化的难易程度），弃之，这样依赖残余的胰酶就可将干细胞消化单细胞。胰蛋白酶是一种动物源性产品，是培养细胞过程中常用的酶。山西进口胰酶介绍
胰蛋白酶广泛应用于食品加工、制药、生化检测和制革等多种行业。在制药工业中，胰蛋白酶可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸，以达到***的目的。胰蛋白酶生物药用于***呼吸道疾病，可以溶解黏痰和脓性痰，还可以***毒蛇咬伤等。由于血清中含有非特异性抑肽酶，故胰蛋白酶不会消化正常组织，而能分解脓性痰等黏性分泌物，促进***、化疗药物向病灶渗透。在食品工业中，胰蛋白酶主要用于水解价值较高的动植物性蛋白等，以牛乳为例，利用胰蛋白酶水解其中的酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白等致敏原，能生产低敏配方奶粉。在制革工业中，胰蛋白酶用于皮革脱灰软化，也可以利用胰蛋白酶提取具有良好生物相容性和生物降解性的胶原蛋白。[1]山西进口胰酶介绍EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。
先用少许**过的PBS调成糊状，然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜，过滤**，分装，4℃保存备用。）;或是hanks或是D-hanks液配制（1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许D-Hanks平衡盐溶液（左右）调成糊状，然后再补足D-Hanks平衡盐溶液，搅拌混匀，置室温4小时或冰箱过夜，并不断搅拌振荡；2.次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤**，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为或。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH至左右。）一般**，至于作用效果，需要消化一次细胞感觉一下，因为不同厂家的酶不一样，有的作用温和，有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜，取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高，所以难以溶解，需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高，就没有必要四度过夜。从理论上来说，四度放置过夜，给**生长的机会，尽管过滤可以出去**，可是出不掉其代谢产物。胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因，考虑有：1、过期或是酶已经部分变性2、溶液ph值不对3、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象，因胰酶多取自动物胰腺，沉淀为**块。
只断裂赖氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***过程的羧基参胰蛋白酶降解物分析与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000，pI，**适pH值～。pH>。Ca2+对酶活性有稳定作用；重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**剂对其活性有强烈**。临床用于抗消肿，工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。胰蛋白酶*典标准胰蛋白酶来源含量本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品计算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。胰蛋白酶制法要求本品应从检*合格的牛、羊或猪胰中提取，生产过程应符合现行版《*品生产质量管理规范》的要求。胰蛋白酶性状本品为白色或类白色结晶性粉末。胰蛋白酶鉴别取本品约2mg，置白色点滴板上，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液，即显紫色。胰蛋白酶检查酸度取本品，加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，依法测定（2010年版*典二部附录ⅥH），pH值应为～。溶液的澄清度取本品，加，依法检查（2010年版*典二部附录ⅨB），溶液应澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取，混合，pH值为）50ml，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。胰酶细胞消化液和胰蛋白酶消化液是一样的吗？
1、胰酶是，就是说PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是－，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH为8左右的时候**易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。6、胰酶EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤**。7、可配2－3乘的胰酶，这样比较节约时间和滤器，用的时候对上**PBS即可。8、储存液放在－20度冰箱冻存，使用液放在4度，用的时候不要放在27度水浴锅温浴，因为这样会让胰酶很快失效，使用前放在室温下一会。胰酶用0.05%还是0.25%的？需不需要含酚红的？山西进口胰酶介绍
有些胰酶溶液里含有酚红作为PH值指示剂。山西进口胰酶介绍
淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗？能，对于胰酶呈黄色的问题，不同品牌也都对此现象进行了测试实验。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离，请放心使用。细胞消化时，胰酶不去除对细胞的影响？细胞消化时，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是没有问题的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比较好去除。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗去除，否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存山西进口胰酶介绍
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