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胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸馏水5～10ml溶解。2.一般应用：1次5000单位，每日1次肌注，用量酌情而定。为防止疼痛，可加适量普鲁卡因。局部用*视情而定，可配成溶液制剂（～，微碱性时活性**强）、喷雾剂、粉剂、油膏等，用作体腔内注射、患部注射、喷雾、湿敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用结晶胰蛋白酶2000单位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀释，以牙痕为中心，在伤口周围作浸润注射，或在肿胀部位上方作环状封闭1～2次。如病情需要可重复使用。若伤肢肿胀明显，可于注射本品30分钟后，切开伤口排毒减压（严重出血者例外），也可在肿胀部位针刺排毒。如伤口已坏死、溃烂，可用其***胰蛋白酶注意事项1.不可作静注。用前需作划痕试验，应注意可能产生过敏反应。2.吸取注射液后应另换针头，以免注射时疼痛。3.外用时，可采用注射用制剂以缓冲液溶解，但必须在3小时内用毕。胰蛋白酶不良反应：1．注射局部疼痛、硬结。2．本品可引起组胺释放，产生全身反应，有寒战、发热、***、头晕、胸痛、***、皮疹、血管神经性水肿、呼吸困难、眼压升高、白细胞减少等。症状轻时不影响继续***，给予抗组胺*和对症*物即可控制，严重时应即停*。3．本品偶可致过敏性休克。胰酶4℃保存，一年有效；-20℃可保存更长时间。广西重组胰酶价格对比
冰冻保存，但不得反复冻融。供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加。测定法取底物溶液、（pH）1ml，混匀，作为空白。取供试品溶液（预热至25℃±℃），立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±℃，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），在237nm的波长处，每隔30秒读取吸光度，共5分钟，每30秒钟吸光度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；A2为直线上开始的吸光度；A1为直线上终止的吸光度；T为A2至A1读数的时间，分；W为测定液中含供试品的量，mg;，吸光度每分钟改变，即相当于1个糜蛋白酶单位。每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。干燥失重取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过（2010年版*典二部附录ⅧL）。胰蛋白酶效价测定底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，加水溶解使成100ml，作为底物原液；取10ml，用磷酸盐缓冲液（取，pH值为）稀释成100ml，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），恒温于℃±℃，以水作空白。广西重组胰酶价格对比胰蛋白酶是一种胰丝氨酸肽链内切酶，作用于多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧。
胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。使用胰酶时需注意哪些细节问题？在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CDMarker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的*组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。
常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据干细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的干细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于干细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。胶原酶：胶原酶是比较少用的，一般是用原代培养时，从组织消化下干细胞。这种方法作用温和，对干细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。胰酶的质量是影响干细胞的消化的关键因素之一，如果配的比较标准，消化的时候就容易消化，反之就不易消化。还要在你看到消化过头的情况下，如果干细胞下来的比较多了，这时可以连同cmf或pbs加上营养液一起传。营养液中有血清，胰酶遇到血清就会自动终止消化，但这样操作对干细胞是有一定的影响的。对于容易消化的干细胞，加入pbs缓冲液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s（根据细胞消化的难易程度），弃之，这样依赖残余的胰酶就可将干细胞消化单细胞。胰酶细胞消化液(不含EDTA)消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
胰酶分装冻存时要注意什么？胰酶分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判断胰酶消化完全？注意：不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才表示消化好了。一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动就可以了，就应该停止消化。6、胰酶适用于哪些细胞消化？它的消化效果与哪些有关呢？胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对纤维性组织和较硬的*组织效果较差。胰酶的消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。广西重组胰酶价格对比
0.25%胰酶消化液（含有EDTA，含酚红）pH值为7.2-7.8。广西重组胰酶价格对比
EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是说，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是－，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH为8左右的时候**易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。6、胰酶EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤除菌。7、可配2－3乘的胰酶，这样比较节约时间和滤器，用的时候对上灭菌PBS即可。8、储存液放在－20度冰箱冻存，使用液放在4度，用的时候不要放在27度水浴锅温浴，因为这样会让胰酶很快失效，使用前放在室温下一会，因为加的量很少，所以一般不会冻坏细胞。9、消化时。 广西重组胰酶价格对比
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