胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被发现,现在已经扩展到多种来源,包括哺乳动物(人、牛、猪和狗)、无脊椎动物和微生物等。胰蛋白酶的商业化生产主要依赖哺乳动物的胰腺组织提取或者重组表达提取。直接从哺乳动物胰腺组织中提取的缺点是生产成本高,易造成其他结构相近的蛋白污染。重组表达提取胰蛋白酶可以缩短提取时间、降低生产成本,提取的蛋白纯度高,通过优化重组表达体系可以提高蛋白的表达量,这些优势为其在医疗、食品等行业中的应用提供了更多的可能性。[1]折叠在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。重庆EDTA胰酶采购
使**或细胞片分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多(依培养器皿的大小而定),以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成片)转为透明、点状(出现细小空隙)时,弃去细胞消化液,或看见培养瓶壁呈白茫状即可。并加入适量的完全培养液终止消化,吹打分散;如见大量细胞片状脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作。(消化过头,可造成大量细胞从瓶壁上脱下,甚至造成细胞破碎。由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂,所以加入完全培养基可以终止反应。胰酶配置方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调pH,过滤**。)3、pbs(:称取胰酶粉末。重庆EDTA胰酶采购胰蛋白酶是一种胰丝氨酸肽链内切酶,作用于多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧。
胰酶消化细胞的原理胰酶消化细胞是一种用来分解细胞质和细胞间物质的化学过程它可以被看成一种简单的动力学过程,它将细胞结合部分的物质分解为其他物质,然后这些留下的物质可以用来维持细胞的高能量水平这种过程通过将脂肪、蛋白质、糖类和其它物质分解为小的离子或者原子小分子的方式来发生。胰酶是细胞分解与吸收物质的一种关键分子,通常有四种类型,它们是肽酶,脂水解酶,载脂蛋白酶和糖水解酶,分别可以将蛋白质、脂肪、脂蛋白和糖类物质分解为更小的离子和分子,以便细胞可以更好地吸收物质,维持其自身的正常功能和形态。
细胞培养的优点:1.研究的对象是活细胞在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。2.研究条件可以人为控制pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。3.研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。4.研究内容便于观察、检测和记录采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。适用于贴壁细胞的消化传代;也可用于组织细胞分离的初步消化。
0.25%胰酶和加了EDTA胰酶区别是什么详细说明
细胞之间是通过CAM(细胞粘性分子)相连的,而很多粘性分子只有在有+2价金属离子,如Ca2+,Mg2+,的存在下才能行使这种功能。EDTA是钙离子的鳌合剂,在胰酶中加入EDTA的作用简单的说就是为了增加胰酶的消化作用,尤其适用于比较难于消化的细胞;同时可以减少胰消化时间,以减少酶对细胞的损伤作用。加入EDTA的消化反应不能通过加入培养液终止,必须离心才能去除EDTA,所以要掌握好消化时间。 使用胰酶细胞消化液(不含EDTA)的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。广西重组胰酶价格对比
胰蛋白酶消化液都由已经过猪细小病毒检测和支原体检测的原料制备。重庆EDTA胰酶采购
胰酶中的酚红有哪些作用?酚红在培养基中被用来作为pH指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明:酚红可以模拟固醇类***(特别是雌***)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测,在做流式细胞检测时,也会使用不含酚红的培养基或者胰酶。图 2. Phenol red test图片来源网络8、在做细胞凋亡检测时,细胞为什么不能用含有EDTA的胰酶消化?Annexin V(膜联蛋白)是Ca2+依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V,进而影响结果,因此需选用不含EDTA的胰酶。建议放入培养箱中进行消化,时间可以长一点。随时观察细胞情况,避免消化过度;也可使用细胞刮刀将细胞刮下,后用***吹匀,比消化简单,还可避免使用胰酶带来的伤害。重庆EDTA胰酶采购
文章来源地址: http://jxhxp.chanpin818.com/swhg/qtswhg/deta_25353495.html
免责声明: 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息,均来源于其对应的用户,本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题,请及时与本网联系,我们将核实后进行删除,本网站对此声明具有最终解释权。