[VIP第1年] 指数:3
以及无血清培养的基础细胞培养基。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，***适于多种正常细胞和肿*细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少。常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清，这样才能维持细胞活力，促进细胞增殖。针对不同的动物细胞，现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方，营养成份更加丰富，血清使用量可降低至1～3%，由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。（serumfreemedium，SFM）经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免**污染造成的危害。F12培养基适用于基因编辑和转染实验。北京培养基价目表
这些重组蛋白和动物来源成分对生物制品的安全性有很大影响。成本低。主要用途应用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培养基分别培养Vero细胞、BHK21细胞和CHO细胞，新生牛血清用量可以从10％降至3％，减少新生牛血清使用批次和批间差的影响，减少生物制品纯化损失，减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险，提高制品安全性。低血清培养基可以在方瓶、3L转瓶、15L转瓶及生物反应器中培养细胞，在*苗生产中可以达到低血清高密度的培养效果。低血清培养基营养成分优于基础培养基，易使细胞增殖迅速，代谢旺盛，代谢产物对细胞有不良影响，易产生细胞老化脱落现象。因此需要适当增加换液次数，增加传代频率。获取同样的细胞量，用低血清培养基将比用传统培养基缩短近1/3的时间，可提高生产效率。采用199(SLM)低血清培养基培养Vero细胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明显高于采用199培养基传统培养获得的滴度。采MEM(SLM)低血清培养基BHK21细胞，在本实验情况下12代内细胞形态和致密度均优于MEM培养基传统培养情况，因而可以预期其产生的口蹄*、甲肝等*苗生产的病毒产量将提高。低血清培养基用于反应器Vero细胞狂犬*苗的生产，实践证明效果良好。采DMEM。广东基础培养基价格查询F12培养基适用于复杂细胞培养实验。
7)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。2）配制可高压**细胞培养基(1)根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分钟。(3)待溶液冷却至室温，加入无菌mol/LL－谷氨酰胺溶液规定体积、无菌％（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。(4)如果必要，用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(5)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。注意事项1）细胞培养用水一般为三蒸水（经石英蒸馏器蒸馏）或超纯水，医*生产上一般为注射用水。2）建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用，因为包装一旦打开，组分可能会变质或因受潮而结团。3）溶解干粉培养基时先加入终体积90％－95％的培养用水，添加剂加完后再补足。4）如需添加的组分较多时，某一组分完全溶解后，再添加另一组分。5）待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠，以免产生沉淀。6）所有成分完全溶解后，培养基应立即过滤或高压**，以免产生沉淀或有微生物污染。7）在过滤**时。
平衡盐溶液（balancedsaltsolution，BSS）简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体，兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度、同时供给细胞生存所必需的能量和无机离子成分的作用。各种BSS的缓冲系统有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液为例，它们主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hank’s液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗将要在细胞培养基中储存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1几种常用的平衡盐溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成分，同时参与许多重要的细胞功能活动。但它们有使细胞凝集的作用，在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时，宜采用Ca2+、Mg2+含量较低的Dulbecco液或无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。无酚红培养基适用于对酚红敏感的细胞实验。
从而使培养基的预热、加热**及冷却过程可在同一设备内完成。该流程的加热和冷却时间比喷射加热连续**流程要长些，但由于在培养基的预热过程同时也起到了**后培养基的冷却，因而节约了蒸汽和冷却水的用量。（2）蒸汽直接喷射型的连续**系统流程中采用了蒸汽喷射器，它使培养液与高温蒸汽直接接触，从而在短时间内可将培养液急速升温至预定的**温度然后在该温度下维持一段时间**，**后的培养基通过一膨胀阀进入真空冷却器急速冷却，从图中可以看出，由于该流程中培养基受热时间短，营养物质的损失也就不很严重，同时该流程保证了培养基物料**先出，避免了过热或**不彻底等现象。（3）由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的**系统连续**的基本设备一般包括：①配料预热罐，将配制好的料液预热到60-70℃，以避免连续**时由于料液与蒸汽温度过大而产生水汽撞击声；②连消塔，连消塔的作用主要是使高温蒸汽与料液迅速接触混和，并使料液的温度很快升高到**温度（126-132）℃；③维持罐，连消塔加热的时间很短，光靠这段时间的**是不够的，维持罐的作用是使料液在**温度下保持5-7min，以达到**的目的；④冷却管，从维持罐出来的料液要经过冷却排管进行冷却。减血清培养基减少了血清成分的变异性。山西F12培养基
无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验。北京培养基价目表
1/2cs生长培养基的培养结果为：马铃薯茎端在1/2cs生长培养基上的存活率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为，叶色浓绿，根系发达、平均根数为8个。如图4所示。对比培养例4：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例4，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为：马铃薯茎端在1/2ms生长培养基上的存活率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为，叶色浓绿，根系发达、平均根数为6个。如图4所示。培养实例4和对比培养例4的培养结果比较：马铃薯茎端在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的存活率均为100％；在相同条件下培养16d时，与1/2ms生长培养基相比，1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳，其茎高、茎中粗、根的数量均优于1/2ms生长培养基。如图4所示。培养实例5：哥伦比亚型拟南芥叶片及根愈伤**诱导(1)拟南芥叶片愈伤**诱导培养基：cs基本培养基+，用超纯水溶解，。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。(2)拟南芥根愈伤**诱导培养基：cs基本培养基+2,，用超纯水溶解，。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。。北京培养基价目表
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