[VIP第1年] 指数:3
在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养，诱导培养基的配方为ms+，诱导培养基的ph值为，在s4中，将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中，增殖培养基的配方为ms+～～，增殖培养基的ph值为，在s5中，将s4中的绣球组培苗放入生根培养基中，生根培养基的配方为1/2ms+～～，生根培养基ph值为。通过采用上述技术方案，通过液体**培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。使用本生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应诱导培养基。DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。青海Ham's F12培养基价目表
参与细胞的代谢活动。此外，通过提供钠，K+和Ca2+，帮助细胞调节细胞膜功能。Na+是细胞外液中**主要的阳离子，对维持渗透压的恒定有决定性的作用，还与Cl－共同参与生物电活动、维持水平衡和酸碱平衡等。K+主要分布在细胞内液，对于***某些酶是必需的，并在调节细胞内环境的酸碱平衡上也有极重要意义。Ca2+和Mg2+主要参与信号传导、能量代谢、脂肪酸合成、核糖体稳定和蛋白质合成等多种生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基质所需阴离子，同时是细胞内电荷的调节者。磷对于细胞的生长、代谢和调控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白质是构成细胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存储和利用的不可或缺的化合物。上述离子对于细胞的作用各有不同，它们共同构成了细胞赖以生存的渗透压、pH和电化学平衡的微环境，细胞对于某种元素的吸收利用会受到其它元素的干扰，例如培养基中过高的钙离子浓度会使镁和锌的吸收利用受到干扰。因此，在保证培养基中上述离子浓度满足要求以外，还需保证上述离子之间种类和比例的平衡。此外，微量元素如铁、钴、镍、硒、碘、铜、锌、锰、铬、钼、氟等对于细胞生长代谢和产物合成都有促进作用。青海Ham's F12培养基价目表MEM培养基是细胞生物学研究中的基础培养基之一。
4、本发明植物**培养基，其不含碘化钾，在绝大多数植物中，碘元素不是必需元素，实验发现去除碘化钾对植物**培养没有影响，并且植物在脱离培养基进行后期培养时仍可以从土壤等基质中富集碘元素，去掉碘化钾成分，也简化了培养基配制过程。5、本发明植物**培养基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，该替换减少的**根离子通过适当增加**铵成分来补充，该替换主要基于两个特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合铁，更容易被植物吸收，有利于植物叶绿体发育，另一方面，发明人发现，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等众多植物**培养基原始ph偏低及ph波动大的主要原因，本发明培养基中使用nafeedta之后，经ph为，而植物**适宜生长的ph一般为，因此，使用nafeedta既促进了植物对铁离子的吸收，又有利于培养基ph的稳定。6、本发明植物**培养基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、烟酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇的用量，该改变特征在于，有效减少愈伤**玻璃化发生，减少酚类物质产生，提高愈伤**的出愈率，实验发现，优化后的培养基出愈时间提前，对多种植物的愈伤**诱导是有益的。
三)、试验结果：初代培养：使用本发明的消毒方法，消毒成功率能达到80％，诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。继代培养：使用本发明的增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。生根培养：使用本发明的生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。本发明所指ms培养基是murashige和skoog研制的培养基，其成分配方表见表1。1/2ms培养基是指大量元素含量为ms培养基的一半，其他成分用量相同。表1、ms培养基成分表本发明涉及的植物生长调节剂有：6-ba—6-苄氨基嘌呤；ga3—赤霉素；iba—吲哚丁酸，naa—萘乙酸。本发明中的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基均为液体培养基。本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。DMEM培养基适用于多种类型的哺乳动物细胞。
培养实例2和对比培养例2的培养结果比较：兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100％；在相同条件下培养28d时，与1/2ms生长培养基相比，1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳，在平均株高、莲座叶大小、根长、花朵数量等方面均优于1/2ms生长培养基；并且，采用上述培养方法，不论是1/2cs生长培养基还是1/2ms生长培养基，均能获得形态完整的花粉，且花粉活力高达％，其特点在于选择了兰兹贝格型拟南芥作为培养对象，且选择了高度适中的培养盒进行培养，克服了传统培养方法无法获得拟南芥整个生育期无菌苗的缺点，所获无菌花***可直接用于花*离体培养等研究内容。如图2所示。培养实例3：油菜无菌苗培养与培养实例1不同的地方在于：步骤(1)所用种子为中双11号油菜种子，其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为：中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100％，培养9d的幼苗，表现为植株健壮、平均株高为，叶色浓绿，茎秆粗壮、平均茎中粗为，根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。对比培养例3：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例3，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。DMEM培养基适用于多种哺乳动物细胞的体外培养和实验研究。青海Ham's F12培养基价目表
RPMI1640培养基在抗体生产和免疫研究中有重要作用。青海Ham's F12培养基价目表
式中：N0—开始**（t=0）时原有活菌数；Nt----经时间t后残存活菌数。k：意义同上；t：表示理论**时间k=（）logNt/N0；比死亡速率常数K，K值大，表明微生物容易死亡。理论**时间的计算需要注意以下几个问题：（1）K值因不同的微生物种类不同、不同的生理状态、不同的外界环境，差别很大，实质上，它是微生物热阻的一种表示形式，微生物的热阻越大，K值也越小。可以取耐热性芽孢杆菌的K进行计算。(2)在计算过程中，N0，Nt如何取值？N0为**开始时培养基中活微生物数，可以参考一般培养基中的活微生物数为（1-2）×107个/ml；Nt通常取，既**失败的概率为千分之一。（3）上述**时间，通常称之为理论**时间，只可以用于工程计算中，在实践过程中，因蒸汽的压力问题（不稳定）、蒸汽的流量问题有很大差别，甚至培养基中的固体颗粒的大小、培养基的粘度等因素，都会影响**效果，实际的设计和操作计算时间可作适当比例的延长或缩短。在实际生产中，通常采用经验数值：间歇**，121℃，20—30分钟；连续**，137℃，15—30s，在维持罐中保温8—20分钟。4、**温度的选择在培养基**过程中，除了杂菌死亡，还伴随着培养基成分的破坏。因此必须选择既能达到**目的。青海Ham's F12培养基价目表
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