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培养实例2：兰兹贝格型拟南芥无菌植株培养培养实例2与培养实例1不同的地方在于：步骤(1)所用种子为兰兹贝格(ler,landsbergerecta)型拟南芥种子，兰兹贝格拟南芥较哥伦比亚拟南芥具有更早的花期，在适宜条件下培养，可以获得处于各发育时期的拟南芥无菌***，包括根、胚轴、叶柄、子叶、莲座叶、茎、花、角果等，其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为：兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100％，培养28d的幼苗，表现为植株健壮、平均株高为，莲座叶发达、平均**大莲座叶长为，叶色浓绿，根系粗壮、平均主根长为，花序含有较多花朵，花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为％。如图2所示。对比培养例2：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例2，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为：兰兹贝格型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100％，培养28d的幼苗，表现为植株健壮、平均株高为，莲座叶发达、平均**大莲座叶长为，叶色浓绿，根系粗壮、平均主根长为，花序发育良好，花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为％。如图2所示。重庆培养基常见问题使用减血清培养基能提高实验的可重复性。
发酵培养基为：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，cecl30-40mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；发酵工艺同实施例1，100l发酵罐中含有70l发酵培养基。设置cecl3的添加浓度为0，，如图1-2所示，随着cecl3添加量的增加，菌体浓度和谷氨酸含量均有所提升，当添加量为10mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，然后出现下降趋势，但是整个过程中，糖酸转化率没有明显改变（附图未显示）；说明cecl3稀土盐能够促进菌株增殖，提高谷氨酸相关合成酶的活力，提高谷氨酸的产量，但是过高的浓度会造成菌株增殖放缓和死亡，谷氨酸产量相应下降。二、通过上述实验确定cecl3添加量为10mg/l，在此基础上，研究2-羟基乙胺对菌体浓度、谷氨酸含量以及糖酸转化率的影响。设置2-羟基乙胺的浓度为，5,10,20,40,80,160mg/l，如图3-4所示，随着2-羟基乙胺添加量的增加，菌体浓度随之增加，相应地，谷氨酸含量和糖酸转化率也有所提升，当添加量为40mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，继续增加2-羟基乙胺的浓度，产生明显的抑菌效果，菌株密度下降明显；原因是，低浓度的2-羟基乙胺可能促进磷脂酰乙醇胺细胞壁组分的合成。
因为解冻时可能会有营养成份析出，影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存，使用前从冰箱取出，放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存，其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，如果细胞生长不良，可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期，对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后，也应低温（2~8℃）贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外，培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。减血清培养基提高了实验结果的可靠性。
本发明属于氨基酸生产技术领域：，具体涉及一种优化的谷氨酸发酵培养基。背景技术：：谷氨酸，是一种酸性氨基酸。分子内含两个羧基，化学名称为α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索逊1856年发现的，为无色晶体，有鲜味，微溶于水，而溶于盐酸溶液，等电点。大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。谷氨酸钠俗称味精，是重要的鲜味剂，对香味具有增强作用。谷氨酸钠***用于食品调味剂，既可单独使用，又能与其它氨基酸等并用。用于食品内，有增香作用。在食品中浓度为，每人每天允许摄入量为0－120微克/千克(以谷氨酸计)。在食品加工中一般用量为－。谷氨酸主要以微生物发酵制备而得，通过优化发酵培养基，使得菌体增殖速率提高，可以提高氨基酸的产量。现有技术对谷氨酸发酵培养基优化进行了大量的研究，例如文献1“基于pb试验和响应面分析法对谷氨酸棒杆菌cnl021发酵培养基优化，**酿造2014年”，通过**陡爬坡试验和响应面分析法对发酵培养基组成进行优化，得到谷氨酸棒杆菌**适发酵培养基组，较未优化培养基的发酵培养基产酸量提高了。F12培养基提供了丰富的营养，支持细胞增殖。四川Ham's F12培养基是什么
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一般情况下应调pH比所需值低～，因过滤**后，pH值会升高约。8）在细胞培养过程中，建议不加或加少量的***，如血清的浓度较低则所加***的量也要相应降低一些。9）建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。如下图所示：图6-1MEM培养基（SLM，MD611）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压图6-2199培养基（MD502）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压培养基**培养基的**方法主要有两种，高压**及um微孔滤膜过滤**。与过滤相比，高压**的工作强度小，相对便宜，失败率低，但易造成营养成分的流失。高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，可在高压**后加入。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。为保证高压**的效果，**设备的验证很关键，可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，因此不需将**时间延长。过滤**大多数培养基采用～μm孔径的微孔滤膜进行过滤**，并且已成为培养基**的发展方向。江西F12培养基供应商
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