但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统,此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量,是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系(株)不同,同一株细胞适应环境也可能不同(细胞耐受性不同等),且存在的地域性水质差异等,在实际生产过程中也可稍作改动,但使用者需做相应的检测(理化及细胞生产试验等)。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH~,在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10~25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖的条件下,细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好单独配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入细胞培养液中。MEM培养基含有多种必需氨基酸和维生素,适合细胞培养。中国香港RPMI1640培养基一般多少钱
所描述的实施例**是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。实施例1一种优化的谷氨酸发酵培养基,其包括发酵培养基a和发酵培养基b;所述发酵培养基a首先添加,然后间隔24h添加发酵培养基b。所述发酵培养基a的制备方法为:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羟基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基a;所述发酵培养基b的制备方法为:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,壳聚糖80mg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基b;采用常规发酵工艺:将黄色短杆菌gdk-9按8%接种量将种子液(od600nm为)接入装有60l发酵培养基a的100l发酵罐中进行发酵培养,发酵培养24h,然后添加10l发酵培养基b,继续发酵培养24h,收集发酵液;整个发酵培养过程中,控制发酵温度35℃,通风比1∶,搅拌转速300r/min,溶氧维持在20%。江苏培养基报价RPMI1640培养基在免疫细胞培养中表现出色。
愈伤**诱导率为100%。如图6所示。对比培养例6:将cs基本培养基替换为ms基本培养基,其余完全同培养实例6,ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为:本氏***叶片愈伤**诱导时,培养15-18d的叶片略微增厚,在叶片四周产生较少的淡绿色愈伤**,愈伤**诱导率为90%,在愈伤**团块上产生的嫩绿色不定芽数量较少;本氏***根愈伤**诱导时,培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**,愈伤**诱导率为100%。如图6所示。培养实例6和对比培养例6的诱导结果比较:用上述方法进行本氏***叶片愈伤**诱导时,cs诱导培养基愈伤**诱导率为100%,而ms诱导培养基的诱导率*为90%,在所述相同培养条件下,与ms诱导培养基相比,cs诱导培养基可更快诱导出大量致密的叶片愈伤**、产生更多的不定芽;用上述方法进行本氏***根愈伤**诱导时,cs诱导培养基与ms诱导培养基诱导出的根愈伤**形态相近,两种培养基的根愈伤**诱导率均为100%。如图6所示。培养实例7:水稻成熟胚愈伤**诱导(1)水稻种子消毒及筛选:a、选种:以籼稻缙恢10号为例,将水稻种子晾晒干燥后于4℃下长期保存,挑选籽粒饱满、大小基本一致的水稻种子,用剪刀从种子中部剪开,去除谷壳。
在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75%酒精中消毒30s,用无菌水冲洗3~4次,使用白猫漂白水和无菌水按1:4的体积比配制消毒液,将外植体放入消毒液浸泡40min。通过采用上述技术方案,这种方式对外植体消毒方法简单,能够**降低外植体的死亡率,消毒成活率较高。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s1中,外植体选择为**绣球的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。综上所述,本发明包括以下至少一种有益技术效果:本发明通过液体**培养技术,以芽为原材料,获取方便,增殖倍率高达8~10倍,生根率达到95%以上,苗木规格整齐,性状保持稳定,同时节省成本,适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。附图说明图1是绣球的液体培养基组培快繁方法的流程示意图。具体实施方式以下结合附图对本发明作进一步详细说明。实施例:参照图1,为本发明公开的一种绣球的液体培养基组培快繁方法,具体步骤如下:(一)、试验材料:供试材料采自江苏东郁植物科技有限公司苗圃的**绣球,品种为无尽夏(endlesssummer“bloomstruck”),外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。(二)、试验方法:绣球**培养过程按以下步骤进行:初代培养、继代培养、生根培养。。无血清培养基为细胞培养提供了更清晰的背景。
**早开发的基础培养基(minimalessentialmedium,MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍,其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后,可***用于多种细胞培养,并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM(MinimalEssentialMedium)培养基有含Earle's平衡盐的类型,也有含Hanks'平衡盐的类型;有高压**型的,也有过滤**型的;还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基础上改良,增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。无血清培养基确保了实验结果的纯净性。中国香港RPMI1640培养基一般多少钱
RPMI1640培养基在抗体生产和免疫研究中有重要作用。中国香港RPMI1640培养基一般多少钱
促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,将s3中的无菌外植体接入增殖培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免增殖培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应增殖培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,每隔8~12周转接入新的增殖培养基。通过采用上述技术方案,经过8~12周后,增殖培养基的效果将会减弱,植物材料也会污染增殖培养基,需要及时更换。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s5中,将s4中的绣球组培苗接入生根培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免生根培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应生根培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s2中,外植体消毒的具体步骤为将树莓外植体叶片剪去,自来水冲洗干净。中国香港RPMI1640培养基一般多少钱
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