胰酶使用注意:1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。胰酶配制方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调,过滤除菌。)3、pbs(:称取胰酶粉末,先用少许灭菌过的PBS调成糊状,然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜,过滤灭菌,分装,4℃保存备用。);或是hanks或是D-hanks液配制(1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks平衡盐溶液()调成糊状,然后再补足D-Hanks平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡;2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH至。)一般,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高。 胰酶的使用浓度是多少?湖南国产胰酶大概价格多少
胰蛋白酶用法用量1.每次~5mg,用蒸馏水5~10ml溶解。2.一般应用:1次5000单位,每日1次肌注,用量酌情而定。为防止疼痛,可加适量普鲁卡因。局部用*视情而定,可配成溶液制剂(~,微碱性时活性**强)、喷雾剂、粉剂、油膏等,用作体腔内注射、患部注射、喷雾、湿敷、涂搽等。3.治蛇毒:取注射用结晶胰蛋白酶2000单位1~3支,加~(或注射用水)4~20ml稀释,以牙痕为中心,在伤口周围作浸润注射,或在肿胀部位上方作环状封闭1~2次。如病情需要可重复使用。若伤肢肿胀明显,可于注射本品30分钟后,切开伤口排毒减压(严重出血者例外),也可在肿胀部位针刺排毒。如伤口已坏死、溃烂,可用其***胰蛋白酶注意事项1.不可作静注。用前需作划痕试验,应注意可能产生过敏反应。2.吸取注射液后应另换针头,以免注射时疼痛。3.外用时,可采用注射用制剂以缓冲液溶解,但必须在3小时内用毕。胰蛋白酶不良反应:1.注射局部疼痛、硬结。2.本品可引起组胺释放,产生全身反应,有寒战、发热、***、头晕、胸痛、***、皮疹、血管神经性水肿、呼吸困难、眼压升高、白细胞减少等。症状轻时不影响继续***,给予抗组胺*和对症*物即可控制,严重时应即停*。3.本品偶可致过敏性休克。江西胰酶哪家便宜胰酶浓度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。
品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分类:细胞消化试剂规格:100ML用途:消化试剂,如胰蛋白酶,被用于将粘附细胞从其附着的表面或底物上分离和降解,以及将组织进行游离,以开展原代细胞培养。产品包括2种常用浓度的γ照射猪胰蛋白酶(1:250)以及一种新型非哺乳动物猪胰蛋白酶替代品,称为ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一种蛋白水解酶和胶原水解酶的混合超滤溶液,可以快速消化,同时不损伤细胞。其非哺乳动物配方使它适用于无血清应用,不需要失效或对酶抑制剂。此试剂可使细胞被快速分离,形成单细胞悬浮物,保持高细胞活力,并使传代时的变异减至**小。
6.磷酸酶EDTA相对不溶。可以用磁力搅拌器搅拌,或将其置于4度的冰箱中,溶解后过滤并**。7.可配备2-3倍血浆酶,节省时间和过滤器。使用时,请对PBS消毒。8.将储存溶液储存在-20°C的冰箱中,然后将溶液储存在4°C。使用时,请勿将其放在27°C的水浴中,因为这会使自由基酶迅速无法使用。使用前放置一次。是的,因为添加的数量很少,因此通常不会冻结细胞。9.在消化过程中,向培养瓶中加入适量的胰酶。个人经验,一般在10cm培养皿中加。加入后,立即摇动培养皿盖住胰酶。一旦充满,用负压吸引多余的胰酶排出,将其加入37度培养箱中进行消化。10.请注意,过量的胰酶对细胞有害,而过量的EDTA也会影响粘附,因此无需将细胞浸入血浆酶中进行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,并具有在37度以下消化的能力。在消化过程中,甚至不需要将一些易于消化的细胞放入培养箱中。请注意,它不能消化太长时间。四、实验所需试剂清单:序列产品名货号CAS备注11000ul蓝吸头FT-10002氢氧化钠JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合树脂chelex100SS6072以上为EDTA-胰蛋白酶的配制,实验请选用高质量试剂。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离,请放心使用。
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶(Trypsin),EDTA等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关,在℃时,胰酶的作用能力**强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度()的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。但是对于EDTA可能会干扰后续的测试分析时,推荐选择不含EDTA的消化液。本产品含有(Trypsin),溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。为改良型,除了具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点之外,消化时间更短,消化效果媲美进口产品,特别适用于难消化的细胞。 消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。福建国产胰酶生产企业
胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA。湖南国产胰酶大概价格多少
胰蛋白酶是一种肽链内切酶,属于丝氨酸蛋白酶家族,不仅可以水解碱性氨基酸(精氨酸或赖氨酸)羧基端的肽键,还可以水解由碱性氨基酸的羧基形成的酰胺键或酯键。胰蛋白酶可以从牛、猪等哺乳动物的胰脏提取,经过纯化后获得结晶,再制成冻干制剂。牛的胰蛋白酶有223个氨基酸,分子量为23800道尔顿,活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水,不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有机溶剂。胰蛋白酶的等电点pH值为10.1,**适pH值范围在7.8~8.5左右,pH值大于9.0时不可逆失活。钙离子对胰蛋白酶的酶活具有保护和***作用。[1]湖南国产胰酶大概价格多少
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