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缓冲液认识作用（二）同时，我们人体的正常生理环境的维持离不开缓冲溶液，认识学习缓冲溶液有利于我们深入认识人体复杂化学反应的机制。缓冲溶液对维持着人体正常的血液p H范围。其中碳酸-碳酸氢钠是血浆中**主要的缓冲对，此对缓冲机制与肺的呼吸功能及肾的排泄和重吸收功能密切相关。正常人体代谢产生的二氧化碳进入血液后与水结合成碳酸,碳酸与血浆中的碳酸氢根离子—组成共轭酸碱对，所以缓冲溶液在医学检验中有着重要的意义。 [4]PBS缓冲液是一种常用的缓冲剂,用于调节pH值和保持溶液的稳定性。辽宁EBSS缓冲液常见问题
制备PBS缓冲液的方法制备PBS缓冲液非常简单，以下是制备1升10×PBS缓冲液的方法：13.将800ml的去离子水加入大容量烧杯中。14.将8g的氯化钠（NaCl）和0.2g的磷酸二氢钾（KH2PO4）加入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。15.用去离子水将溶液补足至1升，继续搅拌至完全溶解。16.用盖子或保鲜膜覆盖烧杯，将烧杯放入冰箱中冷藏保存。注：若需要使用1×PBS缓冲液，只需取10×PBS缓冲液适量稀释即可。
制备PBS缓冲液的方法制备PBS缓冲液非常简单，以下是制备1升10×PBS缓冲液的方法：13.将800ml的去离子水加入大容量烧杯中。14.将8g的氯化钠（NaCl）和0.2g的磷酸二氢钾（KH2PO4）加入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。15.用去离子水将溶液补足至1升，继续搅拌至完全溶解。16.用盖子或保鲜膜覆盖烧杯，将烧杯放入冰箱中冷藏保存。注：若需要使用1×PBS缓冲液，只需取10×PBS缓冲液适量稀释即可。 新疆有酚红缓冲液供应商在进行pH计校准时,首先需要选择合适的pH缓冲溶液。
一、为什么缓冲溶液可以维持PH值的稳定呢？其实这主要是因为缓冲溶液自身的成分和性能，它的成分里包含了酸、盐或碱，所以在一定程度上可以抵消外界加入酸性或碱性溶液带来的影响。二、配制缓冲溶液作用有哪些？1、缓冲溶液是分析检测实验中常会用到的溶液，实验中通常会要求溶液的pH值需要保持在一个规定的范围内，以保证指示剂的显色或变色，这些通过加入一定量的缓冲溶液就能达到目的。2、缓冲溶液在医学检验中也起着很重要的作用，主要是因为缓冲溶液可以保持机体正常血液PH范围，其中碳酸-碳酸氢钠是血液中主要的缓冲对，这与肺呼吸以及肾功能排泄息息相关。而机体正常新陈代谢后产生的CO2，会进入血液与水结合成碳酸,碳酸又与血浆中的碳酸氢根离子组成共轭酸碱对，所以缓冲溶液在医学上就有不可忽视的作用。
该酶标IsC的工作浓度应为1／1?600。?????棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度：①用包被液将抗原由1：50开始作比倍稀释后进行包被，洗涤。②将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1：100稀释，加样，保温、洗涤。③加按工作浓度稀释的酶标IsC抗体，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后读取A值。⑤选择强阳性参考血清的A值为0．8左右、阴性参考血清的A值小于0．1的包被抗的稀释度作为工作浓度，从中选取**适工作浓度。?1．2夹心法测抗原?????在夹心ELISA法中，可用棋盘滴定法同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。①抗体免*球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10．0、1．0和0．1微克／毫升，分别在ELISA板上进行包被，每一浓度包括3个纵行，洗涤。②在1个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另1横行加入弱阳性抗原液，第3横行加入阴性对照液，保温、洗涤。③将酶标抗体用稀释液稀释成3个浓度，例如1：1?000、1：5?000和1：25000。分别加入每个包被浓度的1个纵行中，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后，读取A值。⑤以强阳性抗原的A值在0．8左右、阴性参考的A值小于0．1的条件作**适条件，据此选择包被抗体和酶抗体的工作浓度。缓冲液浓度和温度的影响。
1:50～l:800)后，按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值；为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg／L、lmg／L、／L三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行(每行3孔)，分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对照，将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度，分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色，加酸终止反应，分别读取A值。以强阳性抗原液A值在，阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1．1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择：①用IgG进行包被，洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中，保温、洗涤。③加酸终止反应后，读取吸光度(A)。读取A值在1．0时的酶标抗体稀释度，作为酶标抗体的工作浓度。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统。江苏DPBS缓冲液常见问题
PBS缓冲液可以用于分子克隆和细胞培养等实验。辽宁EBSS缓冲液常见问题
做ELISA确定抗原**佳包被浓度，做方阵滴定具体怎么做呢？选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本，将你的抗原用1*CBPH=*PBPH=（8个条件）后加入96孔板每孔100ul。（一般包被浓度100ng抗原或抗体/孔，**优包被条件需进行试验选择）4度过夜取出后甩干，加入20%NBS封闭每孔200ul。37度2h热封，甩去后拍干即可。将你HRP或AP标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释（倍比稀释4个梯度）即可。棋盘滴定就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定**佳P/N的包被搭配E的试验2．抗原和抗体**佳工作浓度的确定?抗原抗体反应要求在**适比例条件下进行，ELISA反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行**佳工作浓度的滴定和选择，以达到**佳的测定条件。?1）方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释。辽宁EBSS缓冲液常见问题
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