人工合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞生长和繁殖。组成及作用氨基酸:组成蛋白质的基本单位。不同的细胞对氨基酸的需求各异,但几种必需氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,如组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸,细胞可以自己合成,或通过转氨作用由其他物质转化而来。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求,因为谷氨酰胺是作为能源及碳源物质同时被细胞利用,是是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡,所以各种培养液中都含有较多的谷氨酰胺。细胞所能利用的氨基酸是L型同分异构体,D型氨基酸不能被利用。维生素:维持细胞生长的一种生物活性物质,对细胞代谢有重大作用。它们在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。维生素分为水溶和脂溶两大类,的培养液中直接采用ATP和辅酶A。葡萄糖:大部分培养基都以葡萄糖作为能量来源之一。无机盐:维持培养基渗透压平衡,参与细胞的代谢活动。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。Na+是细胞外液中**主要的阳离子,对维持渗透压的恒定有决定性的作用。无血清培养基确保了细胞的纯净生长。河南MEM a培养基市场报价
对于大多数哺乳类动物细胞,渗透压在260~320mOsm/kg的范围内都适宜。在生产、配制细胞培养基的过程中,渗透压的测定较为重要,有助于防止在生产、配制过程中出现称量等方面的错误。反应器高密度培养动物细胞过程,在添加碳酸氢钠的过程中注意渗透压的监控,防止渗透压过高对细胞的损害。温度温度对细胞培养基有较大的影响,温度过高可引起营养成份的降解或破坏,细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。如细胞培养液中的谷氨酰胺,在高温条件下降解的速度较快,如35℃贮存时,放置3天降解25%左右,在4℃贮存3周降解约20%。粘滞性及表面张力含血清细胞培养液的粘滞性主要是由血清引起的,在转瓶培养贴壁细胞时,培养液的粘滞性对细胞生长没有多大影响;但在生物反应器悬浮培养细胞时,细胞培养液的粘滞性则直接影响搅拌转速控制及搅拌剪切力对细胞造成的损伤程度。表面张力对细胞培养有较大的作用,尤其在利用生物反应器进行悬浮培养时,搅拌和通气都会引起泡沫的产生。对于含血清培养液,由于血清中多种蛋白的存在,搅拌时产生的气泡较多,气泡的上升运动对细胞的损伤程度还有争议,但气泡的破裂对细胞有明显的损伤作用。为降低这种损伤。北京RPMI1640培养基联系方式无酚红培养基在细胞实验中减少了不必要的干扰。
培养实例7和对比培养例7的诱导结果比较::用上述方法进行水稻成熟胚愈伤**诱导时,cs诱导培养基与ms诱导培养基诱导出的愈伤**形态大小均相近,出愈率均为100%。如图7所示。培养实例8:液体培养基在植物水培中的应用(1)用不同ph的超纯水配制的液体培养基ph值稳定性比较:a、用不同ph的超纯水配制液体培养基:通常多种因素会导致相同超纯水制水机产出的超纯水ph变动较大,ph通常为。分别选取ph为、、、、、,分别配制ms液体培养基、cs液体培养基、1/2ms液体培养基、1/2cs液体培养基,制作方法为:ms液体培养基为取ms基本培养基置于不同ph的超纯水中溶解并定容至1l;cs液体培养基为取cs基本培养基置于不同ph的超纯水中溶解并定容至1l;1/2ms液体培养基为取1/2ms基本培养基置于不同ph的超纯水中溶解并定容至1l;1/2cs液体培养基为取1/2cs基本培养基置于不同ph的超纯水中溶解并定容至1l。b、结果为:用ph为,ms液体培养基ph为,cs液体培养基ph为,1/2ms液体培养基ph为,1/2cs液体培养基ph为。植物**适宜生长的ph一般为,观察可知,ms液体培养基及1/2ms液体培养基的ph偏酸性且波动较大,其应用于液体培养基时通常需要调节ph,过程繁琐,相比之下。
但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统,此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量,是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系(株)不同,同一株细胞适应环境也可能不同(细胞耐受性不同等),且存在的地域性水质差异等,在实际生产过程中也可稍作改动,但使用者需做相应的检测(理化及细胞生产试验等)。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH~,在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10~25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖的条件下,细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好单独配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入细胞培养液中。RPMI1640培养基能够维持细胞的代谢活性。
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所描述的实施例**是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。实施例1一种优化的谷氨酸发酵培养基,其包括发酵培养基a和发酵培养基b;所述发酵培养基a首先添加,然后间隔24h添加发酵培养基b。所述发酵培养基a的制备方法为:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羟基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基a;所述发酵培养基b的制备方法为:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,壳聚糖80mg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基b;采用常规发酵工艺:将黄色短杆菌gdk-9按8%接种量将种子液(od600nm为)接入装有60l发酵培养基a的100l发酵罐中进行发酵培养,发酵培养24h,然后添加10l发酵培养基b,继续发酵培养24h,收集发酵液;整个发酵培养过程中,控制发酵温度35℃,通风比1∶,搅拌转速300r/min,溶氧维持在20%。河南MEM a培养基市场报价
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