1/2ms生长培养基的培养结果为:中双11号油菜种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养9d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,叶色浓绿,茎秆粗壮、平均茎中粗为,根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。培养实例3和对比培养例3的培养结果比较:中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养9d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,其株高、根的数目优于1/2ms生长培养基,茎粗及平均主根长度与1/2ms生长培养基相近。如图3所示。培养实例4:马铃薯无菌苗培养生长培养基配制:1/2cs基本培养基+蔗糖30g/l+植物凝胶8g/l,用超纯水溶解,。1/2cs基本培养基的成分及用量如表1所示。培养方法:以克新18号马铃薯为例,将配制好的1/2cs生长培养基分装于长、宽、高9cm的耐高温培养盒中,选择生长旺盛的马铃薯脱毒苗,于无菌环境下,根据实际需要,用手术剪刀剪取约1cm长的至少带有1个叶芽的茎端或茎段,用弯头镊子将其1/3-1/2长度垂直插入培养基中;于温度22-23℃、湿度50-70%、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。无酚红培养基减少了酚红对细胞的影响。宁夏MEM a培养基答疑解惑
此法由巴斯德创立,用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种:一种为℃加热15秒,另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下,水煮沸后温度达100℃,煮沸5分钟后可杀死一般**繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠,可将其沸点提高至105℃,既可促进芽胞的杀灭,又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法,常用附诺(Amold)流通蒸气**器,利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒,10-30分钟后**繁殖体被杀死,但对芽孢作用不大。(4)间歇**法(fractionalsterilization)。采用间歇方式达到**目的。将**物品置于阿诺流通蒸气**器内,100℃加热15-30分钟,每日1次,连续3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱过夜,致残存的芽胞发育成繁殖体,次日再通过流通蒸气**器加热而被杀灭。如此反复,既可杀灭芽胞,又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度,则可将温度下降至75-80℃,每次加热时间延长到30-60分钟,常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的**属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气**器(autoclave),在蒸气不外溢的条件下,使锅内压力增高,随之蒸气温度也增高。通常在℃。上海基础培养基报价减血清培养基减少了血清中的未知因素对细胞的影响。
又能使培养基的破坏降低至比较低的工艺条件。许多实验研究结果表明,培养基在高温**的过程中,其营养成分的破坏在很大程度上可以用一级反应来描述其反应速度:式中—表示营养成分破环的速率,C:表示营养成分的浓度K':为反应速度常数,1/s,应速度常数K'与温度的关系,可以使用阿累尼乌斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反应速度常数,1/S:反应的活化能(J/mol)R:气体常数,*J/mol*kT:反应的***温度,k同样,**过程中的反应速度常数也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改写成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意义是指:反应的温度从T1升高到T2,其反应的速度常数分别从k,1增加到k,2;k1增加到k2;培养基的**过程实际上是营养成分破坏、菌体死亡的两个平行性反应,对于平行性反应,反应温度的提高,其两个平行性反应的速度常数都增加,但增加的幅度(大小)却不同,其比值可以表示为:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)实验证明:营养成分为破坏的反应的活化能E的值为E,=—*103J/mol;而菌体死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。
才能满足新细胞合成、细胞代谢等生化反应所需要的物质和能量。细胞培养基的主要成份是水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助营养物质等。此外,还可能含有血清、血清替代成分、pH指示剂等。水是细胞的主要成份,也是细胞赖以生存的主要环境。细胞培养液中90%以上的成份是水。细胞对水的品质非常敏感,水的品质将直接影响细胞培养的效果。而水中通常含有重金属、氯、磷、有机物、热原等污染物,细胞培养用水须经过纯化,品质应符合***典注射用水标准或者超纯水的标准。能源和碳源是用于维持细胞生命和支持细胞生长,主要包括糖、糖酵解的产物和谷氨酰胺,其他氨基酸是次要的能源和碳源物质。细胞能够利用的糖类主要是六碳糖,目前大多体外培养时选取葡萄糖作为细胞的主要碳源和能量来源,因此细胞培养基中基本都含有葡萄糖,含量一般为5~25mmol/L。在葡萄糖浓度较高时,细胞主要通过扩散作用吸收葡萄糖,细胞膜内外的葡萄糖浓度梯度是细胞吸收葡萄糖的动力;在葡萄糖浓度较低时,主要由钠离子推动的高亲和性转运过程使细胞摄取葡萄糖。葡萄糖进入细胞后参与糖酵解、核酸代谢、糖原合成、能量代谢以及一些氨基酸的合成。与体内的能量供应途径不同。无酚红培养基避免了酚红对细胞的潜在毒性作用。
人工合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞生长和繁殖。组成及作用氨基酸:组成蛋白质的基本单位。不同的细胞对氨基酸的需求各异,但几种必需氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,如组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸,细胞可以自己合成,或通过转氨作用由其他物质转化而来。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求,因为谷氨酰胺是作为能源及碳源物质同时被细胞利用,是是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡,所以各种培养液中都含有较多的谷氨酰胺。细胞所能利用的氨基酸是L型同分异构体,D型氨基酸不能被利用。维生素:维持细胞生长的一种生物活性物质,对细胞代谢有重大作用。它们在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。维生素分为水溶和脂溶两大类,的培养液中直接采用ATP和辅酶A。葡萄糖:大部分培养基都以葡萄糖作为能量来源之一。无机盐:维持培养基渗透压平衡,参与细胞的代谢活动。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。Na+是细胞外液中**主要的阳离子,对维持渗透压的恒定有决定性的作用。MEM培养基在细胞生物学研究中广泛应用。辽宁F12培养基采购
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实验组和对照组3选用发酵中期添加琥珀酸,此时,菌体增殖放缓,以产酸为主,琥珀酸对三羧酸循环有正向促进作用,而对乙醛酸循环途径起**作用,从而导致谷氨酸产量的增加;梯度试验发现,琥珀酸添加量过**于10g/l),并不会对谷氨酸产量带来进一步的提升,综合成本考虑,选择低于10g/l的添加量较为合适。对照组2和实验组在发酵中后期添加壳聚糖,能够改变细胞壁的通透性,促进谷氨酸分泌到胞外,从而提升谷氨酸产量和糖酸转化率;但是壳聚糖添加量(超过100mg/l)过大会导致抑菌现象发生,进而造成菌株死亡。虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,或在实施案例之外的树种实施本方法,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改,改进或范围的扩大,均属于本发明要求保护的范围。宁夏MEM a培养基答疑解惑
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