3)拟南芥叶片愈伤**的诱导方法:用手术剪刀剪开长势良好的无菌叶片,用镊子将其取出摆放在步骤(1)的诱导培养基中,使伤口接触培养基;于温度23-25℃、湿度50-70%、光照强度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)拟南芥根愈伤**的诱导方法:用镊子取出无菌苗的根,用手术剪刀剪开后平铺于步骤(2)的诱导培养基中,培养条件同步骤(3)。(5)cs诱导培养基的诱导结果为:拟南芥叶片愈伤**诱导时,培养6-8d在切口处出现颗粒状愈伤**,培养24-26d获得嫩绿色致密的团块状愈伤**,颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100%;拟南芥根愈伤**诱导时,培养5-7d在切口处开始出现少量颗粒状愈伤**,培养20-22d获得较大体积的淡黄色松脆型愈伤**,且在愈伤**周围观察到大量致密分布的白毛,颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100%。如图5所示。对比培养例5:将cs基本培养基替换为ms基本培养基,其余完全同培养实例5,ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为:拟南芥叶片愈伤**诱导时,培养7-10d在切口处出现颗粒状愈伤**,培养24-26d获得嫩绿色致密的团块状愈伤**,颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100%。F12培养基适用于复杂细胞培养实验。培养基价格
培养实例2:兰兹贝格型拟南芥无菌植株培养培养实例2与培养实例1不同的地方在于:步骤(1)所用种子为兰兹贝格(ler,landsbergerecta)型拟南芥种子,兰兹贝格拟南芥较哥伦比亚拟南芥具有更早的花期,在适宜条件下培养,可以获得处于各发育时期的拟南芥无菌***,包括根、胚轴、叶柄、子叶、莲座叶、茎、花、角果等,其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养28d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,莲座叶发达、平均**大莲座叶长为,叶色浓绿,根系粗壮、平均主根长为,花序含有较多花朵,花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为%。如图2所示。对比培养例2:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例2,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养28d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,莲座叶发达、平均**大莲座叶长为,叶色浓绿,根系粗壮、平均主根长为,花序发育良好,花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为%。如图2所示。海南RPMI1640培养基采购无血清培养基为细胞培养提供了纯净的背景。
又能使培养基的破坏降低至比较低的工艺条件。许多实验研究结果表明,培养基在高温**的过程中,其营养成分的破坏在很大程度上可以用一级反应来描述其反应速度:式中—表示营养成分破环的速率,C:表示营养成分的浓度K':为反应速度常数,1/s,应速度常数K'与温度的关系,可以使用阿累尼乌斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反应速度常数,1/S:反应的活化能(J/mol)R:气体常数,*J/mol*kT:反应的***温度,k同样,**过程中的反应速度常数也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改写成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意义是指:反应的温度从T1升高到T2,其反应的速度常数分别从k,1增加到k,2;k1增加到k2;培养基的**过程实际上是营养成分破坏、菌体死亡的两个平行性反应,对于平行性反应,反应温度的提高,其两个平行性反应的速度常数都增加,但增加的幅度(大小)却不同,其比值可以表示为:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)实验证明:营养成分为破坏的反应的活化能E的值为E,=—*103J/mol;而菌体死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。
本氏***叶片及根愈伤**诱导的对比效果图,a:叶片愈伤**;b:叶片愈伤**诱导率;c:根愈伤**;d:根愈伤**诱导率;a和c中bar=;图7是cs和ms两种培养基上,水稻成熟胚愈伤**诱导的对比效果图,a:水稻成熟胚愈伤**;b:水稻成熟胚愈伤**诱导率;a中bar=;图8是用不同ph的超纯水(ph为)配制的cs、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基ph值稳定性比较效果图;图9是在未调ph和将ph调至、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基中马铃薯幼苗的生长状况的比较效果图,a:不同液体培养基培养前的无菌苗生长情况;b1、c1和d1:1/2ms未调ph液体培养基培养效果;b2、c2和d2:1/2cs未调ph液体培养基培养效果;b3、c3和d3:ms未调ph液体培养基培养效果;b4、c4和d4:cs未调ph液体培养基培养效果;b5、c5和d5:1/;b6、c6和d6:1/;b7、c7和d7:;b8、c8和d8:;a、b、c和d中bar=;图10是对在未调ph和将ph调至、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基中马铃薯幼苗的茎高(a)、茎中粗(b)、根长(c)、鲜重(d)进行统计的比较效果图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。实施例一,本实施例广适性植物**培养基,其每1000ml培养基中含有:kno32662mg、。MEM培养基在细胞实验中表现出高效的稳定性。
促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,将s3中的无菌外植体接入增殖培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免增殖培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应增殖培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,每隔8~12周转接入新的增殖培养基。通过采用上述技术方案,经过8~12周后,增殖培养基的效果将会减弱,植物材料也会污染增殖培养基,需要及时更换。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s5中,将s4中的绣球组培苗接入生根培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免生根培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应生根培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s2中,外植体消毒的具体步骤为将树莓外植体叶片剪去,自来水冲洗干净。DMEM培养基提供了细胞生长所需的基本营养成分。广东基础培养基产品介绍
无酚红培养基确保了细胞实验结果的准确性。培养基价格
无芽孢:E=209—250*103J/mol。显然,(5)式的比值〉1,说明提高温度对于第二个平行反应,即菌体死亡的反应是有利的。提高温度,虽然两个平行性反应的反应速度常数都提高了,但是,达到同样的**效果,所需要的时间却缩短了,由于***个反应也就是营养成分破坏的反应速度常速增加的少,因此,有利于减少培养基在**过程中营养成分的破坏。换言之,高温短时**对于培养基营养成分是有利的。通常所说的高温短时**可以提高生产效益,其理论根据就在于此。结论1:当**温度上升时,微生物杀死速率的提高要超过培养基成分的破坏速率的增加。要减少营养成分的破坏,可升高温度**。结论2:在**时选择较高的温度、较短的时间,这样便既可达到需要的**程度,同时又可减少营养物质的损失。(二)、影响**效果的因素(1)微生物种类:不同的微生物k值不同。(2)初始菌量:在保持N值不变的前提下,t与初始菌量N0的对数成正比。(3)培养基成份:油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。(4)传热与混合状况:影响受热均匀度。(5)培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。(6)蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和**温度。(7)pH:酸性pH下可加快微生物热死速率三、培养基的工业**。培养基价格
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